Verdenshistorien er enda mer fantastisk i denne storslagne oppfølgeren, som overgår originalen. I rollen som Larry Daley topper Ben Stiller en stjernespekket rolleliste som omfatter Ricky Gervais, Owen Wilson, Hank Azaria og Robin Williams. Larry er tidligere nattevakt på Naturhistorisk museum, der utstillingene får liv etter solnedgang. Men nå skal de nattlige vennene hans overføres til Smithsonian Institutions arkiver, og det fører ham tilbake til en hysterisk, hemningsløs kamp mot en sur, egyptisk farao som vil herske over museet...og verden!